ساخت وکتور بیان پروتئین پوششی ویروس pvx به منظور تولید آنتی ژن اختصاصی ویروس در باکتری

تشخیص ویروس¬ها با استفاده از آنتی¬بادی¬های اختصاصی اهمیت ویژه¬ای برای کنترل بیماری¬های گیاهی خصوصا در برنامه تولید بذر سیب¬زمینی دارد. یکی از مهمترین ویروس¬های سیب¬زمینی potato x potexvirus (pvx) با گستره جهانی می¬باشد. در این تحقیق به منظور تولید آنتی¬بادی اختصاصی pvx ژن coat protein (cp) آن به صورت نو¬ترکیب بیان گردید. برای این منظور ابتدا واکنش rt-pcr ¬با استفاده از آغاز¬گر¬های اختصاصی cp حاوی سایت برشی آنزیمی انجام گرفت. الکتروفورز محصول pcr بر روی ژل آگارز، قطعه تکثیر شده به طولbp 714 را تایید کرد. ژن cp و پلاسمید pgbkt7 توسط آنزیم¬های bamhi و ecori برش داده شدند و پس از خالص¬سازی، لیگاسیون بین آنها صورت گرفت. پلاسمید نو¬ترکیب pgbkt7-cp با الکتروپوراسیون به باکتری e. coli منتقل و در آن تکثیر گردید. پس از گزینش باکتری¬های حاوی پلاسمید نو¬ترکیب به کمک pcr و استخراج پلاسمید از آنها، توالی¬یابی درست بودن کلون ایجاد شده را تایید کرد. در مرحله بعد، برش آنزیمی و لیگاسیون ژن cp در پلاسمید pet-21a که توسط آنزیم¬های برشی bamhi و ecori برش خورده بود، صورت گرفت. این پلاسمید نو¬ترکیب به منظور بیان پروتئین مورد نظر به باکتری e. coli منتقل شد. بیان پروتئین موردنظر به کمک روش sds-page تایید شد. پس از بیان و خالص¬سازی، پروتئین موردنظر جهت تولید آنتی¬بادی اختصاصی pvx مورد استفاده قرار می¬گیرد.